黄曲霉毒素M1 ELISA检测试剂盒 (货号:MA440) 本试剂盒用于定量检测牛奶样本中黄曲霉毒素M1残留。 检测样本:原奶、奶粉 样本前处理: -原奶:2-8°C冷藏,离心 -奶粉:稀释 分析时间:75分钟(不包括样本前处理时间) 检测限: -原奶:0.005ppb -奶粉:0.05ppb 特异性:交叉反应率(%) 分析物 交叉反应率 黄曲霉毒素M1 100 黄曲霉毒素M2 16 1. 检测原理 本试剂盒在预包被特异性黄曲霉毒素M1抗体的微孔内进行。将黄曲霉毒素M1标准品和样本加入微孔,**次孵育时,自由的黄曲霉毒素M1分子和黄曲霉毒素M1抗体结合,洗板除掉所有未结合的物质。加入黄曲霉毒素-HRP偶联物进行*二次孵育,偶联物封闭所有未**次孵育时未结合的抗体结合位点,然后加入一定量显色底物反应以检测酶活性。加终止液终止反应,450nm波长酶标仪检测,标准品或样品中的黄曲霉毒素M1浓度与吸收光强度成反比。 2.试剂盒组成 微孔板:96孔,预包被黄曲霉毒素M1抗体。板条可拆开单独使用。 黄曲霉毒素M1标准溶液:7瓶,各1.5ml,浓度分别为:0ppt,5 ppt,10 ppt,25 ppt,50 ppt,100 ppt,250 ppt。 酶偶联物:1瓶,250ul浓缩酶偶联物。 酶偶联物稀释液:1瓶,20ml。 20X浓缩洗液:1瓶,50ml。 显色液:1瓶,15ml。 终止液:1瓶,9ml。 3.需要使用但试剂盒不提供的试剂和设备 -蒸馏水 -离心机,较好是冷冻离心机。 -20-200μl、100-1000μl移液器及吸头 -20-300μl多道移液器及吸头 -含450nm波长的酶标仪 4.注意事项 -仅用于体外检测。 -一些试剂内含防腐剂;终止液内含有H2SO4,具有腐蚀性;酶偶联物对身体有害。 -小心操作,避免试剂接触皮肤、眼睛和粘膜。 5.操作和存储说明 -2-8°C冷藏保存,切勿冷冻。 -将未用完的板条用试剂盒提供的铝箔袋重新密封。 -切勿使用过期产品。 -不同批次试剂盒内的成分不能混用。 -请使用试剂盒内提供的说明书。 6.样本前处理步骤 6.1原奶 -**在挤奶后24小时内检测,否则**用或类似物做稳定处理。 -2-8°C预冷样本,并将样本在2-8°C、离心力3000g离心10分钟。 -分离除去脂肪。 -所得脱脂奶直接用于检测。 -如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在10-500ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本2倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效检测范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数2为样本中的较终浓度值。 -如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在25-1250ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本5倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数5为样本中的较终浓度值。 -如果样本中黄曲霉毒素M1浓度在10-500ppt范围,用样本稀释液(MA444)将样本10倍稀释,以使样本的黄曲霉毒素M1浓度达到有效范围。从标准曲线所读值乘以稀释倍数10为样本中的较终浓度值。 6.2奶粉 -称取10g奶粉,用蒸馏水定容至100ml。 -摇晃直至奶粉*溶解。样本稀释倍数为10. 7.工作溶液准备 黄曲霉毒素M1标准品:即用(使用前轻摇混匀); 酶偶联物:注意,为了收集到管内所有酶偶联物,使用前低速离心数秒钟。计算当次实验的需要量,用酶稀释液将浓缩酶偶联物1/100稀释(例如,20ul浓缩酶偶联物+1980ul酶稀释液)。稀释混匀过程不得剧烈震荡。每次吸取浓缩酶偶联物的量不得少于20ul。 洗液:用蒸馏水1:20稀释(1+19)。注意:如果出现结晶,将溶液置于室温并搅拌直至结晶*溶解。 稀释后的洗液在室温放置24小时内有效,2-8°C放置两周内有效。 显色液:即用。显色液对光敏感,应避免光直射,避光保存。 终止液:即用。 酶稀释液:即用 8.检测步骤 8.1检测前注意事项 -检测前将所有试剂室温放置1小时; -使用后立即将所有试剂放置于2-8°C; -不得改变检测程序; -不得延长或缩短孵育时间; -孵育温度不得**25°C或低于18°C; -孵育过程中不得晃动酶标板; -使用**的移液器及吸头; -一旦开始实验,不要间断地完成所有步骤,不要让微孔干透; -ELISA方法结果的再现性很大程度取决于洗板过程的效率和一致性,要按照介绍的程序洗板; -为避免交叉污染,加不同样品和标准品时要更换移液器吸头; -不得让吸头接触到微孔内的液体或者微孔内表面; -孵育时要避免光直射。建议孵育时用封板膜封板。 8.2检测步骤 1.计算需要用到的微孔数量,标记较大光吸收值孔、标准品孔和样本孔的位置。注意要考虑到都要做重复。取出需要的板条,并将未使用的板条重新用铝箔袋密封。准备同等数量的预混合板条。 2.加入100ul各标准品/样本到相应微孔,轻摇混匀后封板膜封板。 3.室温孵育45分钟。不的延长次孵育时间,不能使用自动振荡器。 4. 洗板 -孵育后,倒掉孔内液体; -将微孔加满工作浓度洗涤液,然后倒掉洗涤液; -用力上下在吸水纸上拍板,将微孔内液体*拍干。 重复洗涤过程4次。 在干净的吸水纸上拍板,拍干微孔内的液体。但不可使微孔干透。 5.用多道移液器,每孔加入100ul酶偶联物溶液。来回轻摇混匀并盖封板膜。 6.孵育15分钟。 7.重复步骤4洗板。 8.显色:用多道移液器加100μl显色液到微孔,来回晃动数秒钟。 9.室温避光孵育15分钟。 10.用多道移液器加50μl终止液到各孔。来回晃动数秒钟充分混匀。 10.在1小时内,用酶标仪450nm波长读数。 9. 计算结果 -计算标准品和样品的平均吸光值; -用计算得到的平均吸光值分别除以0标准品的吸光值并乘以100; 标准品的吸光度值(或样品) ---------------------------- X100= (%)吸光度值 0标准的吸光度值 (Bo ) -以标准品浓度值(ng/ml)的半对数值为横坐标,B/B0值为纵坐标绘制标准曲线; -将样本的B/B0值带入校准曲线,得到相应的浓度值; -要得到样本中黄曲霉毒素M1的浓度值,还需要将从校准曲线读到的浓度乘以相应样本的稀释倍数。 10.样品标准曲线示例 11.结果评价 计算出结果后,还需要验证检测效果。通过将得到的结果和说明书提供的技术参数比较验证。如果结果与参数不符,请检测试剂盒的有效期、读取吸光值使用的波长、以及操作过程是否正确。如果不是操作错误,请联系我们的技术支持。 12.试剂盒参数 描述 参数 平均Bo吸光度 ≥0.7 OD450nm B/Bo 50% 20-50ppt 标准品平均变异系数 ≤ 6 % 13.免责声明 出现阳性结果时,**用确证方法对样本检测。TECNA公司不承担任何因为使用者错误使用试剂盒造成的损失。 供应霉菌毒素试剂盒 黄曲霉毒素B1 呕吐毒素 玉米赤霉烯酮 T2毒素 赭曲霉毒素 伏马毒素